液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。

色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類，尺寸規格也不同：

①常規分析柱(常量柱)，內徑2~5 mm(常用4.6 mm，國內有4 mm和5 mm)，柱長10~30 cm；

②窄徑柱(narrow bore，又稱細管徑柱、半微柱semi-microcolumn)，內徑1~2 mm，柱長10~20 cm；

③毛細管柱(又稱微柱microcolumn)，內徑0.2~0.5 mm；

④半制備柱，內徑>5 mm；

⑤實驗室制備柱，內徑20~40 mm，柱長10~30 cm；

⑥ 生產制備柱內徑可達幾十厘米。柱內徑一般是根據柱長、填料粒徑和折合流速來確定，目的是為了避免管壁效應。

色譜柱按色譜固定相基質如硅膠基質分：

① 反相色譜柱：反相色譜填料常是以硅膠為基礎，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等；

② 正相色譜：正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)，以及其他具有極性官能團，如胺基團(NH2，APS)和氰基團(CN，CPS)的鍵合相填料；

③ 離子交換色譜柱：以磺化交聯強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱，常用規格：強陰離子色譜柱(SAX)，強陽離子交換色譜柱(SCX)。

① 拿到一根新色譜柱時，先測柱效；

② 保留在新色譜柱上測得的色譜圖，并記錄條件；

③ 定期檢測柱效。

色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。

在后兩種情況發生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2 mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相（與柱內相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平。

柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30 mm），可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效，這是值得的。

通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質的填料，只能在pH 2~9范圍內使用。柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強的物質保留于柱頂，特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂的填料上。新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補加填料使柱效恢復。

每次工作完后，最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用，應每隔4~5天開機沖洗15分鐘。

① 存放前的處理：除去雜質、鹽等，防止細菌生長；

② 合適的存放溶劑；

③ 保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間；

④ 避免機械震動；

⑤ 注意存放的溫度。

色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。

① 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩。

② 應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變為全部是水，反之亦然。

③ 一般說來色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。

④ 選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。

⑤ 避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。預柱是針對流動相來保護色譜柱，保護柱是針對樣品來保護色譜柱。

⑥ 經常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規分析需要50~75mL。

下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：

如果分析用流動相是水(緩沖鹽)/甲醇體系，清洗就用水和甲醇，如果分析用水(緩沖鹽)/乙腈體系，建議仍用水和乙腈清洗，因為甲醇的粘度系數較高，洗脫強度又弱于乙腈。

從水系直接換到有機系，一般情況下，不要使用甲醇：水（50：50）沖洗色譜柱，因為甲醇：水（50：50）時的粘度系數最高，很容易造成壓力超上限值，易損壞色譜柱。

一般15 cm的柱子須用50 mL純水以上（20倍柱體積），25 cm柱子用80 mL純水以上沖洗柱子才能充分洗去鹽，之后才能換甲醇沖洗后保存。

如果分析條件是加溫的，建議到清洗完后再關柱溫箱，因為溫度降低導致流動相粘度升高，很容易造成壓力超上限值。

最后把泵，檢測器，柱溫箱，自動進樣器等設為待機狀態。

記�。�拿到一根從未用過的色譜柱時一定要先看其使用說明！

參考來源：百科

臨床副總：周燕  15395111123

分析副總：許楊  18156579625

藥學副總：孟廣東  13385600212

萬邦官網：http://www.sendifs.com/

審核 | 許楊

編輯來源| 楊亞楠

排版 | 楊越 王清云